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技術(shù)文章

TSZ Elisa試劑盒工作濃度的選擇
點(diǎn)擊次數(shù):914 更新時(shí)間:2017-10-27

TSZ Elisa試劑盒在免疫酶技術(shù)中,首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小變化,便可導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng)。另外,由于濃度過高,可使非特異性反應(yīng)增加,而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此,正式試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度。

酶標(biāo)記抗體的滴定方法是:將抗原(或抗體)物理吸附于固相載體上,然后將經(jīng)過一系列稀釋的酶標(biāo)抗體(或抗Ig抗體)與吸附在載體上的抗原(或抗體)起反應(yīng),以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià),或稱工作濃度。

其步驟為:先將抗原(或抗體)用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為0μg/ml左右,于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.ml,4℃**,次日以洗滌緩沖液洗滌3次。酶標(biāo)記抗體用%BSA-PBS液依次稀釋成∶00,∶200,∶400,∶800,∶600……(根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定),分別加入反應(yīng)孔中,每個(gè)稀釋度二孔,每孔0.ml,37℃孵育小時(shí)后洗滌。然后加底物液,每孔0.ml,37℃0~30分鐘。以2M H2SO4 0.05ml終止反應(yīng)。

結(jié)果判定主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值。并以O(shè)D為縱座標(biāo),結(jié)合物濃度為橫座標(biāo),繪制滴定曲線。由曲線上查得OD值為.0左右,且曲線斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度,即為該標(biāo)記物的工作濃度。

有關(guān)試驗(yàn)的試劑及器材均見TSZ Elisa試劑盒部分。
250G    鹽酸胍    蛋白組學(xué)級(jí)    GUANIDINE HYDROCHLORIDE        8-88-9
500G    鹽酸胍    蛋白組學(xué)級(jí)    GUANIDINE HYDROCHLORIDE        8-88-9
00G    溴酚藍(lán),鈉鹽    蛋白組學(xué)級(jí)    BROMOPHENOL BLUE SODIUM SALT        7720-78-7
50G    溴酚藍(lán),鈉鹽    蛋白組學(xué)級(jí)    BROMOPHENOL BLUE SODIUM SALT        7720-78-7
00MG    辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷    蛋白組學(xué)級(jí)    OCTYL-B-D-THIOGLUCOPYRANOSIDE        7720-78-7
G    辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷    蛋白組學(xué)級(jí)    OCTYL-B-D-THIOGLUCOPYRANOSIDE        7782-63-0
G    辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷    蛋白組學(xué)級(jí)    OCTYL-B-D-GLUCOPYRANOSIDE        7782-63-0
500MG    辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷    蛋白組學(xué)級(jí)    OCTYL-B-D-GLUCOPYRANOSIDE        7782-63-0
TSZ Elisa試劑盒

 

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